(Flowcytometrie, FCM) is een celanalysator die de fluorescentie-intensiteit van gekleurde celmarkers meet. Het is een hightech technologie die is ontwikkeld op basis van de analyse en sortering van afzonderlijke cellen. Het kan snel de grootte, interne structuur, DNA, RNA, eiwitten, antigenen en andere fysische of chemische eigenschappen van cellen meten en classificeren, en kan gebaseerd zijn op de verzameling van deze classificaties.
Flowcytometer bestaat hoofdzakelijk uit de volgende vijf delen:
1 Stroomkamer en vloeistofsysteem
2 Laserlichtbron en straalvormingssysteem
3 Optisch systeem
4 Elektronica-, opslag-, weergave- en analysesysteem
5 Celsorteersysteem
Onder hen is laserexcitatie in de laserlichtbron en het bundelvormingssysteem de belangrijkste meting van fluorescentiesignalen in flowcytometrie. De intensiteit van het excitatielicht en de belichtingstijd zijn gerelateerd aan de intensiteit van het fluorescentiesignaal. Laser is een coherente lichtbron die verlichting met een enkele golflengte, hoge intensiteit en hoge stabiliteit kan bieden. Het is de ideale excitatielichtbron om aan deze eisen te voldoen.
Er bevinden zich twee cilindrische lenzen tussen de laserbron en de stroomkamer. Deze lenzen focusseren een laserstraal met een cirkelvormige dwarsdoorsnede uitgezonden door de laserbron tot een elliptische straal met een kleinere dwarsdoorsnede (22 μm x 66 μm). De laserenergie binnen deze elliptische straal wordt verdeeld volgens een normale verdeling, waardoor een consistente verlichtingsintensiteit wordt gegarandeerd voor cellen die door het laserdetectiegebied gaan. Aan de andere kant bestaat het optische systeem uit meerdere sets lenzen, gaatjes en filters, die grofweg in twee groepen kunnen worden verdeeld: stroomopwaarts en stroomafwaarts van de stroomkamer.
Het optische systeem voor de stroomkamer bestaat uit een lens en een gaatje. De belangrijkste functie van de lens en het gaatje (meestal twee lenzen en een gaatje) is het focusseren van de laserstraal met een cirkelvormige dwarsdoorsnede, uitgezonden door de laserbron, tot een elliptische straal met een kleinere dwarsdoorsnede. Dit verdeelt de laserenergie volgens een normale verdeling, waardoor een consistente verlichtingsintensiteit voor cellen in het laserdetectiegebied wordt gegarandeerd en interferentie door strooilicht wordt geminimaliseerd.
Er zijn drie hoofdtypen filters:
1: Long pass filter (LPF) - laat alleen licht met golflengten hoger dan een specifieke waarde door.
2: Short-pass filter (SPF) - laat alleen licht met golflengten onder een specifieke waarde door.
3: Bandpassfilter (BPF) - laat alleen licht in een specifiek golflengtebereik door.
Verschillende combinaties van filters kunnen fluorescentiesignalen op verschillende golflengten naar individuele fotomultiplicatorbuizen (PMT's) sturen. Filters voor het detecteren van groene fluorescentie (FITC) vóór PMT zijn bijvoorbeeld LPF550 en BPF525. De filters die worden gebruikt om oranjerode fluorescentie (PE) voor de PMT te detecteren zijn LPF600 en BPF575. De filters voor het detecteren van rode fluorescentie (CY5) vóór de PMT zijn LPF650 en BPF675.
Flowcytometrie wordt voornamelijk gebruikt voor celsortering. Met de vooruitgang van de computertechnologie, de ontwikkeling van de immunologie en de uitvinding van de monoklonale antilichaamtechnologie worden de toepassingen ervan in de biologie, geneeskunde, farmacie en andere gebieden steeds wijdverspreider. Deze toepassingen omvatten analyse van de celdynamiek, celapoptose, celtypering, tumordiagnose, analyse van de werkzaamheid van geneesmiddelen, enz.
Posttijd: 21 september 2023
