(Flow -cytometrie, FCM) is een celanalysator die de fluorescentie -intensiteit van gekleurde celmarkers meet. Het is een hightech-technologie die is ontwikkeld op basis van de analyse en het sorteren van enkele cellen. Het kan snel de grootte, interne structuur, DNA, RNA, eiwitten, antigenen en andere fysische of chemische eigenschappen van cellen meten en classificeren en kan gebaseerd zijn op het verzamelen van deze classificaties.
Flowcytometer bestaat voornamelijk uit de volgende vijf delen:
1 stroomkamer en vloeistofsysteem
2 laserlichtbron en balkvormingssysteem
3 Optisch systeem
4 Elektronica, opslag, display en analysesysteem
5 Cels sorteersysteem
Onder hen is laseruitexcitatie in het laserlichtbron en het bundelvormingssysteem de belangrijkste meting van fluorescentiesignalen in flowcytometrie. De intensiteit van het excitatielicht en de belichtingstijd zijn gerelateerd aan de intensiteit van het fluorescentiesignaal. Laser is een coherente lichtbron die een enkele golflengte, hoge intensiteit en hoge stabiliteitsverlichting kan bieden. Het is de ideale excitatielichtbron om aan deze vereisten te voldoen.
Er zijn twee cilindrische lenzen tussen de laserbron en de stroomkamer. Deze lenzen richten zich op een laserstraal met een cirkelvormige dwarsdoorsnede die uit de laserbron wordt uitgestoten in een elliptische balk met een kleinere dwarsdoorsnede (22 μm x 66 μm). De laserergie binnen deze elliptische balk wordt verdeeld volgens een normale verdeling, waardoor een consistente verlichtingsintensiteit wordt gezorgd voor cellen die door het laserdetectiegebied gaan. Aan de andere kant bestaat het optische systeem uit meerdere sets lenzen, pinholes en filters, die ongeveer in twee groepen kunnen worden verdeeld: stroomopwaarts en stroomafwaarts van de stroomkamer.
Het optische systeem voor de stroomkamer bestaat uit een lens en pinhole. De hoofdfunctie van de lens en pinhole (meestal twee lenzen en een pinhole) is om de laserstraal te concentreren met een cirkelvormige dwarsdoorsnede die door de laserbron wordt uitgestoten in een elliptische balk met een kleinere dwarsdoorsnede. Dit verdeelt de laserenerg volgens een normale verdeling, waardoor de consistente verlichtingsintensiteit voor cellen over het laserdetectiegebied wordt gewaarborgd en interferentie van verdwaaldlicht wordt geminimaliseerd.
Er zijn drie hoofdtypen filters:
1: Long Pass -filter (LPF) - laat alleen licht met golflengten hoger dan een specifieke waarde door.
2: Short -pass filter (SPF) - laat alleen licht met golflengten onder een specifieke waarde door.
3: Bandpass -filter (BPF) - Laat alleen licht in een specifiek golflengtebereik doorgaan.
Verschillende combinaties van filters kunnen fluorescentiesignalen op verschillende golflengten sturen naar individuele fotomultiplicatorbuizen (PMT's). Filters voor het detecteren van groene fluorescentie (FITC) voor PMT zijn bijvoorbeeld LPF550 en BPF525. De filters die worden gebruikt om sinaasappel-rode fluorescentie (PE) voor de PMT te detecteren, zijn LPF600 en BPF575. De filters voor het detecteren van rode fluorescentie (Cy5) voor de PMT zijn LPF650 en BPF675.
Flowcytometrie wordt voornamelijk gebruikt voor celsortering. Met de vooruitgang van computertechnologie, worden de ontwikkeling van immunologie en de uitvinding van monoklonale antilichaamtechnologie, de toepassingen in biologie, geneeskunde, apotheek en andere gebieden steeds wijdverbreider. Deze toepassingen omvatten celtynamica -analyse, celapoptose, celtyping, tumormiagnose, analyse van de werkzaamheid van geneesmiddelen, enz.
Posttijd: SEP-21-2023
