(Flowcytometrie, FCM) is een celanalysator die de fluorescentie-intensiteit van gekleurde celmarkers meet. Het is een hightechtechnologie die is ontwikkeld op basis van de analyse en sortering van individuele cellen. Het kan snel de grootte, interne structuur, DNA, RNA, eiwitten, antigenen en andere fysieke of chemische eigenschappen van cellen meten en classificeren, en kan gebaseerd zijn op de verzameling van deze classificaties.
Een flowcytometer bestaat hoofdzakelijk uit de volgende vijf onderdelen:
1 Stroomkamer en vloeistofsysteem
2 Laserlichtbron en straalvormingssysteem
3 Optisch systeem
4 Elektronica, opslag-, weergave- en analysesysteem
5 Celsorteersysteem
Laserexcitatie in de laserlichtbron en het bundelvormingssysteem is de belangrijkste meting van fluorescentiesignalen in flowcytometrie. De intensiteit van het excitatielicht en de belichtingstijd zijn gerelateerd aan de intensiteit van het fluorescentiesignaal. Laser is een coherente lichtbron die verlichting met een hoge intensiteit en hoge stabiliteit kan leveren met één golflengte. Het is de ideale excitatielichtbron om aan deze eisen te voldoen.
Tussen de laserbron en de stromingskamer bevinden zich twee cilindrische lenzen. Deze lenzen focussen een laserstraal met een cirkelvormige doorsnede die door de laserbron wordt uitgezonden tot een elliptische straal met een kleinere doorsnede (22 μm × 66 μm). De laserenergie in deze elliptische straal is normaal verdeeld, wat zorgt voor een consistente verlichtingsintensiteit voor cellen die door het laserdetectiegebied gaan. Het optische systeem bestaat daarentegen uit meerdere sets lenzen, pinholes en filters, die grofweg in twee groepen kunnen worden verdeeld: stroomopwaarts en stroomafwaarts van de stromingskamer.
Het optische systeem vóór de stromingskamer bestaat uit een lens en een pinhole. De belangrijkste functie van de lens en de pinhole (meestal twee lenzen en een pinhole) is om de laserstraal met een cirkelvormige doorsnede die door de laserbron wordt uitgezonden, te bundelen tot een elliptische straal met een kleinere doorsnede. Dit verdeelt de laserenergie volgens een normale verdeling, waardoor een consistente verlichtingsintensiteit voor cellen in het laserdetectiegebied wordt gegarandeerd en interferentie door strooilicht tot een minimum wordt beperkt.
Er zijn drie hoofdtypen filters:
1: Langdoorlaatfilter (LPF) - laat alleen licht door met een golflengte hoger dan een specifieke waarde.
2: Kortdoorlaatfilter (SPF) - laat alleen licht door met golflengtes onder een bepaalde waarde.
3: Banddoorlaatfilter (BPF) - laat alleen licht binnen een specifiek golflengtebereik door.
Verschillende filtercombinaties kunnen fluorescentiesignalen met verschillende golflengten naar individuele fotomultiplicatorbuizen (PMT's) sturen. Filters voor het detecteren van groene fluorescentie (FITC) voor een PMT zijn bijvoorbeeld LPF550 en BPF525. De filters die gebruikt worden voor het detecteren van oranje-rode fluorescentie (PE) voor de PMT zijn LPF600 en BPF575. De filters voor het detecteren van rode fluorescentie (CY5) voor de PMT zijn LPF650 en BPF675.
Flowcytometrie wordt voornamelijk gebruikt voor celsortering. Met de vooruitgang in computertechnologie, de ontwikkeling van immunologie en de uitvinding van monoklonale antilichaamtechnologie, worden de toepassingen ervan in de biologie, geneeskunde, farmacie en andere vakgebieden steeds breder. Deze toepassingen omvatten celdynamische analyse, celapoptose, celtypering, tumordiagnostiek, analyse van de werkzaamheid van geneesmiddelen, enz.
Plaatsingstijd: 21-09-2023
